RESUMO
El uso de glucocorticoides está prohibido en el campo deportivo durante las competencias si son administrados por vías sistémicas, para lo cual, WADA definió un nivel de reporte de 30ng/mL para los compuestos padre y sus metabolitos. En este trabajo ha sido desarrollada una metodología analítica para la determinación cualitativa de los principales metabolitos de algunos glucocorticoides sintéticos: Betametasona, Budesonida, Dexametasona, Metilprednisolona, Prednisolona, y Triamcinolona Acetónido, presentes en muestras de orina conservadas por el Laboratorio de Control al Dopaje de COLDEPORTES. La metodología incluyó una comparación entre la extracción de los analitos libres y conjugados con glucurónido (para determinar cuál de las dos fracciones era más útil en el análisis de estas sustancias), su separación por cromatografía liquida de alta eficiencia con ionización positiva y la detección por medio de trampa iónica (HPLC-MS-MS). Se seleccionaron los metabolitos mayoritarios a través de sus tiempos de retención, posteriormente se fragmentaron para obtener sus espectros y a través de la abundancia se determinó la cantidad presente en cada fracción (libre y conjugada). Se identificaron los seis glucocorticoides y un total de doce metabolitos, que permitirán hacer un rastreo más prolongado del consumo de las sustancias. Además se confirmó que las cantidades para la mayoría de los compuestos de interés, fueron más altas en la fracción libre de las muestras de orina, pero que no es posible eliminar el proceso de hidrolisis porque algunos metabolitos se excretan conjugados.
Glucocorticoids use is prohibited on the sport during competitions when they are administered by systemic routes for which WADA defined a reporting level of 30ng/ml for parent compounds and their metabolites. In this paper has been developed an analytical methodology for the qualitative determination of the main metabolites of some synthetic glucocorticoids: Betamethasone, Budesonide, Dexamethasone, Methylprednisolone, Prednisolone and Triamcinolone Acetonide, present in urine samples preserved by the Laboratory of Doping Control of COLDEPORTES. The methodology included a comparison between the extraction of free and conjugated with glucuronide analytes (to determine which of the two fractions was more useful in the analysis of these substances), their separation by high performance liquid chromatography with positive ionization and detection using ion trap (HPLC -MS- MS). Major metabolites were selected by their retention times, later fragmented to obtain its spectra and through their abundance determine the amount present in each fraction (free and conjugated). There were identified the six glucocorticoids and twelve metabolites, that will allow to make a more extended screening of the consumption of these substances. Also it was confirmed that the amounts for most of the compounds of interest, were higher in the free fraction of the urine samples, but it is not possible to eliminate the hydrolysis process because some metabolites are excreted as conjugates.
RESUMO
Con este trabajo se pretendió ver el efecto sobre el perfil hormonal sexual y en especial sobre la concentración de testosterona después de administrar dos sustancias que bloquean por diferentes mecanismos la degradación de ésta. Además comprobar, utilizando la técnica gases-combustión-espectrometría de isótopos estables (gc-cirms), si la testosterona que se acumula en el organismo por estas inhibiciones se debe simplemente al bloqueo de los mecanismos de degradación o a que alguno de los compuestos administrados entra en la ruta metabólica como precursor para aumentar su producción. Con tal propósito, se estudiaron los efectos que tenía el inhibidor de la aromatasa 3, 6, 17 androstenetriona (6-Oxo) sobre el perfil hormonal sexual de dos voluntarios sanos y confirmamos mediante el análisis isotópico la participación de esta sustancia en la ruta de producción de testosterona mediante el estudio de sus metabolitos mayoritarios de excreción: androsterona y etiocolanolona. Luego se estudió el efecto que tenía la administración de este inhibidor en combinación con un inhibidor del citocromo p-450 (6, 7, dihidroxibergamotin-dhb) en otros dos voluntarios. En los dos experimentos se observó un aumento del perfil hormonal, especialmente de la concentración de dehidroepiandrosterona (dhea) y testosterona, explicando por qué se promocionan en el comercio este tipo de mezclas para aumentar la masa muscular y, en consecuencia, la apariencia física.
This work aimed to see the effect on the sexual hormonal profile and in particular on the concentration of testosterone after administration of two different substances that block the mechanisms of its degradation. In addition check, using the technique of stable isotopes (gc-c-irms), if the testosterone that accumulates in the body by these inhibitions is due simply to the blocking of the mechanisms of degradation or any of the compounds administered go into the route as a metabolic precursor to increase its production. To accomplish this we studied the effects that initially had the aromatase inhibitor 3, 6, 17 androstenetriona (6-Oxo) on the sexual hormonal profile of two healthy volunteers and confirmed, by the isotopic analysis, that this substance participate in the road testosterone production by studying its major metabolites of excretion: Androsterone and Ethiocholanolone. Subsequently we studied the effect of the administration of this inhibitor in combination with an inhibitor of cytochrome p-450 (6 , 7, dihidroxibergamotin-dhb) in two other volunteers. In both experiments showed an increase in the hormonal profile especially in the concentration of dehydroepiandrosterone (dhea) and testosterone, explaining the reason of why such mixtures are promoted to increase muscle mass and thus the physical appearance.